利用液体闪烁计数器测量瞬时化学发光强度

　　目前,发光分析技术在生物医学等领域得到越来越广泛的应用[1～3],各种专用发光分析仪也相继问世[4],但价格较贵。用于β射线测量的液体闪烁计数器,实际上是测量射线作用下闪烁体的发光,这种发光是一种稳定的,而且是多光子的事件[5]。生物化学发光一般为瞬时的,且为单光子事件,它的发光值在反应物相互接触的瞬时达到最大,然后迅速下降。因此,直接利用液体闪烁计数器测量生物化学发光受到了限制。

　　我们对液体闪烁计数器的测量室进行了改装,改装的液体闪烁计数器能与专用的发光分析仪一样方便地加样,解决了液体闪烁计数器不能及时加样及时测量的问题,进而用于生物化学发光的测量。

　　1　材料和方法

　　将FJ-2115自动液体闪烁计数器(西安262厂生产)顶盖打开,移去测量室顶部铅盖,装上专门加工的带有注射小孔的铅盖,并加用黑色橡皮垫圈,以避免光线透入。选择相加测量方式,利用荧光素酶-ATP发光体系对改装的装置进行测试:①用NaOH-甘氨酸缓冲液将荧光素酶(中科院上海植物生理研究所)配制成3.5 mg/ml的浓度。②将ATP标准(德国B.M公司)用Tris-HCl缓冲液稀释成1×10-7mol/L, 1×10-8mol/L,……, 1×10-13mol/L的标准系列浓度。③分别取各标准液200μl加入发光管中。④将发光管送入测量室后,从注射孔注入800μl荧光素酶溶液,测6 s的发光值N。

　　2　结果

　　2.1　发光测量

　　将各标准液的6 s发光值NI减去本底值N0,并取对数得:Yi=lg (Ni-N0),将浓度Ci取对数得:Xi=lgCi,以Yi为纵坐标,Xi为横坐标作图(图1)。

　　FJ-2115的测量结果与LKB-1251 (瑞典LKB公司生产的发光分析仪)的测量结果具有良好的相关性(r=0.98),且FJ-2115的灵敏度略高于LKB-1251。

　　2.2　稳定性

　　对同一浓度的ATP分别用LKB-1251和改装的FJ-2115液体闪烁计数器重复测量20次,其误差分别为7.8%和8.1%,两者结果相近,无显著性差异。

　　2.3　改装的FJ-2115对β射线测量的影响

　　改装前3H的测量效率为51.2%,本底为45CPM,品质因素为58.25。改装后3H的测量效率为51.1%,本底为48 CPM,品质因素为54.4。

　　3　讨论

　　液体闪烁计数器是用来测量β射线的专用仪器,有两个光电倍增管,采用符合测量方式(即两个光电管同时有信号时才给出信号,否则无信号输出)。如果用它来测量诸如生物化学发光之类的单光子事件时,则需采用相加测量方式,这样,其测量效率就比单光电倍增管的专用发光分析仪要提高一些,同时噪声信号也会有所增加。本研究将自动液体闪烁计数器改装成能及时加样及时测量的发光分析仪,其测量性能与专用发光分析仪相近,有些指标还要好于专用发光分析仪。发挥了一机多能的作用,在不增加投资的条件下,为拥有液体闪烁计数器的单位开展化学发光分析研究提供了方便。改装后的液体闪烁计数器同样可以测量β射线。

　　参　考　文　献

　　1　Steven H. Abstracts of theⅪth internationalsymposium on bioluminescence and chemiluminescence2000. Luminescence, 2000, 15: 199

　　2　Champiat D, Matas N, Monfort Bet al. Applications ofbiochemiluminescence to HACCP. Luminescence,2001, 16: 193

　　3　Kricka L J, Stroebel J, Stanley P E. Bioluminescentfusion conjugates and bioluminescent immunoassays:1988-1998. Luminescence, 1999, 14: 39

　　4　Stanley P E. Commercially available fluorometers,luminometers and imaging devices for low-light levelmeasurements and allied kits and reagents: surveyupdate. Luminescence, 1999, 14: 201

　　5　舒柏华,叶维新,陈　格等.自动液体闪烁计数器连续监测125I技术.同济医科大学学报, 1990, 19 (1): 55